大鼠肺成纤维细胞*培养基说明书

大鼠肺成纤维细胞*培养基说明书细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
大鼠肺成纤维细胞*培养基说明书细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
 
0.312-20 ng/mL人载脂蛋白A1(apo-A1)ELISA试剂盒

0.312-20 ng/mLELISA Kit for Human Apolipoprotein A-I

15.6-1000 pg/mL人脂联素(ADP)ELISA试剂盒

15.6-1000 pg/mLELISA Kit for Human Adiponectin

0.78-50 ng/mL人水通道蛋白2(AQP-2)ELISA试剂盒

0.78-50 ng/mLELISA Kit for Human Aquaporin-2

0.156-10 ng/mL人水通道蛋白3(AQP-3)ELISA试剂盒

0.156-10 ng/mLELISA Kit for Human Aquaporin-3
大鼠肺成纤维细胞*培养基说明书青春双歧杆菌 Bifidobacterium adolensentis洋葱伯克霍尔德氏菌 Burkholderia cepacia

香菇 Lentinula edodes丁香直丝链霉菌 Streptomyces lilacinorectus

三宝垄根霉 Rhizopus semaranzensis大鼠真皮成纤维细胞*培养基

粟酒裂殖酵母 Schizosaccharomyces pombe人前列腺细胞

二色小单孢菌 Micromonospora bicolor小鼠骨髓基质细胞*培养基

中慢生华癸根瘤菌 Mesorhizobium huakuii臭曲霉 Aspergillus foetidus

香菇 Lentinula edodes地衣芽孢杆菌 Bacillus licheniformis

不动杆菌 Acinetobacter sp.甘薯喙壳 Ceratocystis fimbriata

酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae肺形侧耳，平菇 Pleurotus pulmonarius

NCTC 1469(小鼠正常肝细胞)灰色变异链霉菌 Streptomyces griseovariabilis

人脐静脉平滑肌细胞大鼠冠状动脉平滑肌细胞*培养基

链球菌 Lactococcus lactisRaji，人Burkitt's淋巴瘤细胞

汤卜逊沙门氏菌 Salmonella thompson小鼠腮腺细胞*培养基
本公司提供的细胞都是现货供应，详细大鼠肺成纤维细胞*培养基说明书说明书！

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人角膜内皮细胞*培养基说明书功能：
（1）       血管平滑肌细胞的再生能力是原发血管病变的重要因素。
（2）       表达钙通道及ICAM-1和VCAM-1，参与血管壁的炎症反应。
（3）       与血管疾病的进展和稳定有关。
 生理变化：
（1）       主动脉硬化。
（2）       主动脉瘤
（3）       主动脉钙化。
基本特性：
（1）       组织来源于正常大鼠大动脉组织。
（2）       鉴定：肌动蛋白，alpha-SMA和Desmin免疫荧光染色。
（3）       原代细胞培养末期液氮冻存。
（4）       每冻存管细胞数：>5×105 cells/1ml。
（5）       肌动蛋白，alpha-SMA和Desmin免疫荧光染色验证。
（6）       不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

人角膜内皮细胞*培养基说明书运输和保存：
视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。
1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。
2)T-25培养瓶充满*培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。
操作流程：
1.1 主要试剂与仪器：倒置相差显微镜（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293细胞的复苏培养传代及冻存：
1.2.1 细胞的复苏培养 从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。 将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液（37℃预热，8～10倍体积）离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内，在37℃、5％co2及饱和湿度下培养。
1.2.2 细胞传代 原代培养的hek－293细胞48h换液1次，细胞长至60%～70%融合时，用0.25%胰酶消化1～2min，将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散，为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次，获得细胞悬液，然后加入倍量的培养基，温和混匀，吸管分装混合液，传代扩增细胞。
1.3 细胞形态的观察 在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。
1.4 细胞的计数 常规消化细胞，待细胞变圆、脱壁并浮起，加入少量培养基离心，再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液，用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数，按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液＝(四方格细胞数之和/4) ×104。
1.5 细胞的贴壁率 指数生长期的细胞，以0.25％胰酶消化成单细胞悬液，计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中，每两小时随机取出3瓶细胞，吸除培养基及未贴壁细胞，加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞，取其平均值，按照公式：贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) ×100％，计算贴壁率。 
1.6 生长曲线 取指数生长期的细胞用胰酶消化制成单细胞悬液，以1×104/孔接种于24孔板，每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔，计数每孔细胞的数目并计算平均值。连续计数10d，绘制细胞生长曲线

15.6-1000 pg/mL人胎盘碱性磷酸酶(ALPP)ELISA试剂盒

15.6-1000 pg/mLELISA Kit for Human Alkaline phosphatase, placental type

78-5000 pg/mL人乙酰胆碱脂酶(AChE)ELISA试剂盒

78-5000 pg/mLELISA Kit for Human Acetylcholinesterase

0.312-20 ng/mL人去唾液酸糖蛋白受体1（ASGPR 1）ELISA试剂盒

0.312-20 ng/mLELISA Kit for Human Asialoglycoprotein receptor 1

31.2-2000 pg/mL人精氨酸酶1(Arginase-1)ELISA试剂盒

31.2-2000 pg/mLELISA Kit for Human Arginase-1
人角膜内皮细胞*培养基说明书平菇 Pleurotus sp.异常汉逊酵母 Hansenula anomala

HO-8910PM(人高转移卵巢细胞)Hut-102(人皮肤T淋巴瘤细胞)

人甲状腺滤泡上皮细胞*培养基球孢白僵菌 Beauveria bassiana

HBE(人支气管上皮样细胞)lovo, 人结肠细胞

香菇 Lentinula edodes人脐带血单个核细胞

酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiaeC2C12(小鼠成肌细胞)

白黄侧耳 Pleurotus cornucopiae酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

SHG-44 (人胶质瘤细胞)丁酸梭菌 Clostridium butylicom

金色链霉菌 Streptomyces aureus凝结芽孢杆菌 Bacillus coagulans

ECV-304(人脐静脉内皮细胞)HT-29/大肠细胞

NCI-H520(人肺鳞细胞)多粘类芽胞杆菌 Paenibacillus polymyxa

小鼠肺大静脉内皮细胞*培养基LLC-MK2(恒河猴肾细胞)

香菇 Lentinula edodes克鲁斯假丝酵母 Candida krusei