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所使用的样本应满足以下要求
点击次数：406 更新时间：2022-01-10
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利用离心柱内硅基质膜提取猪伪狂犬病毒DNA，以此为模板，在特异引物和TaqDNA聚合酶的作用下，经高温变性，低温退火、中温延伸的循环，使特异的DNA的片段拷贝数放大一倍。经过30次循环，使扩增的DNA的片段放大数百万倍。将扩增的DNA的片段进行电泳，经染色后在紫外灯照射下，肉眼可见DNA的片段的扩增带，进而判断待检样本中是否含有猪伪狂犬病毒。
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所使用的样本应满足以下要求：
1、血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2、血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3、尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4、细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5、组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6、标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
7、不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
