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的使用方法及使用注意事项介绍
点击次数：476 更新时间：2020-07-09
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采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被样本抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并*洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的样本呈正相关。
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的使用首先应平衡至室温（20-25°C ）再试验（ 取出所需反应板）
1. 加入50ul标准品、血清标本于相应反应板孔中。
2. 每孔加入100ul酶联物，轻轻混匀30秒(重要)，室温60分钟。
3. 洗板：甩尽板内液体，用蒸馏水或者洗涤液（普通洗涤液，自配）洗涤反应板，并去除
水滴（在厚叠吸水纸上拍干）；这样反复洗涤5次。
4. 每孔加入100ul显色液， 轻轻混匀10秒，室温20分钟。
5. 每孔加入50ul终止液。轻轻混匀30秒；30分钟内在450nm处读OD值。
以OD值为纵坐标，以标准品浓度为横坐标，绘制标准曲线。根据血清样品的OD值可在标准曲线上查出其浓度。
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的注意事项：
1、若显色过浅，可适当延长底物温育时。
2、实验严格按照说明书的操作进行，实验结果判定必须以酶标仪读数为准。
3、冻结标本溶解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀宜轻缓，避免气泡，可上下颠混合，不要在混匀器上强烈震荡。
4、酶标包被板开封后如未用完，应立即装入密封袋中加干燥剂保存。
5、浑浊或有沉淀的标本应先离心或过滤，澄清后再检测。
6、标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP,也会产生假阳性反应。保存过久可发生聚合在ELISA中可使本底加深。
7、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测，取平均值，以减小实验误差。
8、反复冻融会使蛋白效价降低，所以代测样本如需保存作多次检测，宜少量分装冰存。
