ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。

    ELISA的检测目的是为了实验提供准确的实验依据，为了保证实验数据的可靠性，在实验过程中必须坚持全面的质量控制和全过程质量控制，在收集标本前都必须有一个完整的计划。

ELISA标本的处理：

1、血清：室温血液私人凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，如有沉淀形成，应再次离心

3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4.细胞培养上清：检测分泌性的成分时，用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）仔细收集上清，检测细胞内的成分时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右，通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成分。

5.组织标本：切割标本后，称取重量，加入一定量的PBS，PH7.4，用液氮迅速冷冻保存备用，标本融化后任然保持2-8°C的温度，加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分，离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，分装后一份待检测，其余冷冻备用，

6.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行试验，若不能马上进行试验，可将标本放于-20°C保存，单应避免反复冻融。

     在检测时，受检标本（测定其中的抗原）与固相载体表面的抗体反应。洗涤后加入酶标记的抗体，通过反应结合在固相载体上。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。

注意事项：

1、每个样本量收集体积=100ulx检测种类，如果要做复孔，标本量收集体积=100ulx检测种类x2

2、样本收集后若在一周内进行检测可保存于2-8°C，若不及时检测，请进行分装，冻存于-20°或-80°C，避免反复冻融

3、试剂盒的检测范围不等同于样本中待测物的浓度范围，建议实验前通过相关文献预估样本中待测物的浓度并通过预实验确定样本。

4、血清标本采集是应注意避免溶血，红细胞溶解是会释放出具有过氧化物酶活性的物质，溶血标本可能会增加非特异性显色

5、为了保证尿液检测的准确性，必须正确收集尿液标本和保存，收集尿液的容器必须要清洁干燥，最好使用一次性的容器，避免因用药并清洁不到而造成的污染，尿液样本必须新鲜，留取后，应及时检测或保存

6、标本宜在新鲜是检测如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应。如在冰箱中保存过久，其中可能发生聚合，间接法ELISA中乐视本底加深，

7、反复冻融会使蛋白效价降低，所以待测样本如需多次检测，宜少量分装冻存。