解决PCR产物中出现假阴性或无扩增产物（即阳性对照中有条带，而样品则无条带）方法：

　　1、条带放置时间过久,核酸被降解，最好在48h内进行电泳检测。

　　2、DNA模板纯度低，如含有杂蛋白质或Taq酶抑制剂，可对DNA进行再次纯化或重新用优质试剂盒提取DNA; DNA浓度太低时，可以加大模板量；对具有二级结构DNA使用较好的聚合酶；提取DNA时，避免吸入酚类试剂。

　　3、对设计不合理的引物进行重新设计合成；引物应高浓度小量分装保存，防止多次冻融而降解失效；检测引物OD值并进行电泳检测以确保两条引物浓度一致。

　　4、酶失活时，更换新酶，或新旧两种酶同时使用，以分析是否因酶的活性丧失或不够而导致假阴性。

　　5、PCR反应条件：提高变性/退火温度；适当增加循环次数。

　　6、Mg2+浓度过低可影响PCR扩增产量甚至使PCR扩增失败，而Mg2+浓度过高会降低PCR的特异性，因而可适当提高Mg2+浓度。

　　7、如果靶序列发生突变或缺失时，也会影响引物和模板的特异性结合，产生假阴性结果。

　　Q3：非特异性条带扩增或者条带出现拖尾现象

　　Answer：

　　1、当引物特异性差或引物形成二聚体时，可重新设计引物或者使用巣式PCR

　　2、若模板或引物浓度过高，可适当降低模板或引物浓度

　　3、酶量过多，则适当减少酶量

　　4、Mg2+浓度偏高，则降低镁离子浓度

　　5、退火温度偏低，适当提高退火温度或使用二阶段温度法（94变性，65左右退火与延伸）

　　6、循环次数过多，不仅会降低扩增效率，且会使错误掺入率增加，因此需要减少循环次数。